北京白癜风医院那家好 http://m.39.net/pf/bdfyy/bjzkbdfyy/摘要液相色谱-质谱（LC-MS）技术在临床精准化医疗中发挥着日趋重要的作用。医学检验人员应重视LC-MS技术在质量管理中的普适性和特殊性。美国临床实验室标准协会CLSI发布的C62-A指南中“额外质量保证”环节—分析批设置值得我们借鉴，应建立适应我国临床医学检验实验室的分析批规范化设置的具体方案，保证LC-MS临床应用检测结果的准确性。
正文
液相色谱-质谱（liquidchromatography-massspectrometry，LC-MS）自21世纪初进入临床领域后，在国际上广泛应用于激素检测、治疗药物监测、新生儿遗传代谢疾病筛查和法医*理学等领域［1,2］。LC-MS作为医学检验实验室自建检测方法（laboratorydevelopedtests，LDT），在国内临床实验室的应用面临诸多挑战。临床质谱方法的质量控制除了需要满足常规临床检测方法的质控要求外，还需要满足一个重要且特殊的质控环节—分析批设置。分析批设置在美国临床实验室标准协会（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute，CLSI）于年发布的C62-A液相色谱-质谱临床应用指南中属于“额外质量保证”的内容［3］。尽管有多个参考指南对分析批设置的重要性进行了阐述［3,4,5,6］，并建议在每一个批次样本检测前进行这一特殊质量控制环节。目前国内越来越多的医学实验室将LC-MS用于临床检测，规范的分析批设置有利于平台稳定和结果准确。
医院检验科质谱平台建立至今十余年积累了大量临床经验，规范化设置分析批序列的具体操作流程、判断标准和注意事项等。这些经验有利于启发国内同行对分析规范化操作的重视，提高国内临床LC-MS分析的质量［3，7］。
一、LC-MS临床检测中分析批设置的普适性和特殊性
为保证临床检验的准确性，所有临床检测方法在检测中都要遵循质量管理体系要求。常规的室内质控程序包括质控品检测、质控规则的制订和判断以及失控的处理等。所有检测都必须符合室内质控要求后才能进行样本检测。质谱技术应用于临床检验领域，首先也应该服从临床实验室的质量管理体系的基本要求，如做Levey-Jennings质控图、选择适当的质控规则等。但是，仅用常规的质量控制程序很难对LC-MS系统进行全面评估，需要增加“额外的质量保证”程序来保障质谱平台的稳定性和检测结果的准确性。
作为LDT方法，LC-MS检测系统十分复杂、自动化程度低、整合性差，不同的参数、前处理方法或者参考物质都可能会影响检测结果的准确性。为确保在检测过程中色谱条件和质谱条件处于最佳状态，C62-A指南在“额外质量保证”章节中特别强调了LC-MS日常质量控制中分析批设置的特殊性［3］。LC-MS特殊性在于对每一个分析批次都需要进行额外的质量控制程序。这完全不同于常规临床检测方法的室内质控流程，需要在每一个批次常规检测方法的质量控制基础上额外增加系统适用性测试（systemsuitabilitytests，SST）、双空白样品及单空白样品检测［3］。
二、LC-MS临床检测中分析批序列设置
LC-MS临床检测中分析批序列推荐依次为SST样本、双空白样本、单空白样本、校准品、质控品、待测样本以及质控品［3］。建议质控品在待测样本的前后都进行检测，以确保LC-MS检测全过程的稳定性和检测结果的准确性。为保证检测质量，需尽可能地保持条件一致。因此，除SST样本外，所有样品建议按照待检测顺序在同一分析批中、同一时间、由同一分析者使用相同的试剂进行处理。
（一）SST
SST的概念于年由美国FDA首次提出，是一种确保LC-MS在方法开发验证之后，在实际检测过程中能够监测仪器检测性能状态的质量控制手段。LC-MS检测系统具有高灵敏度的特性，但是这也带来了检测的重现性问题。不同批次间的质谱响应可能存在差异。这些差异可能是由于前序分析批次中残留的污染或系统平衡时间不足等原因导致检测系统还未达到最佳状态造成的。因此，为了考察仪器状态是否达到样本检测要求，需要在正式样本测试前进行SST。
SST的根本目的是判断仪器是否处于正常检测状态。SST样本是未经过前处理含有待测物和内标的溶液。通过直接检测含有待测物和内标的溶液，可以避免由于前处理等因素造成的影响，能够直观地反映色谱质谱仪器系统的状态。
C62-A导则推荐在每个分析批前、预防性维护后、仪器卸真空后或者是当系统平衡出现问题的时候进行SST［8,9］，主要检测未经提取的含有待测物和内标的溶液，推荐至少分析3次。由于样本第1次检测时LC-MS系统仍可能未达最佳检测状态，不推荐纳入系统适用性的考察之中。本实验室SST样本由初始梯度流动相作为溶剂配制而成，在每个分析批前进行6次检测。将SST样本后5次的参数同方法验证阶段的参数（包括噪音、信号、保留时间、色谱峰分离度和色谱峰对称性等）进行比较，当符合待测物和内标峰面积比CV6%的情况下才能判定仪器状态良好，并进行后续检测。
（二）双空白样本
双空白样本是指既不包含待测物也不包含内标物质的基质经过与临床样本相同的提取步骤后得到的样本。检测双空白样本的目的是确保系统中无影响检测的干扰物。双空白样本可以是由无待测物和内标的临床样本基质或类似基质经过提取后获得。不建议使用纯溶剂直接作为双空白样本，因其无法体现前处理过程中可能存在的干扰物或者污染物。
C62-A推荐在分析批次的开始和结束，以及在高浓度的校准品或者质控品进样后检测双空白样本［3，10］，用以考察实验过程中是否存在污染及残留。判定标准为：（1）在待测物的检测通道中不出现异常峰（峰面积小于定量下限的20%）；（2）内标检测通道的中峰面积应小于含有内标样本的内标峰面积的5%，满足以上两点即可认为系统无背景噪音或者残留效应。
在本实验室内源性物质检测中，我们使用不含待测物和内标的无激素血浆经过固相萃取作为双空白样本，例如类固醇激素检测。在外源性物质检测中，如治疗药物监测，我们采用明确未服用该药物的患者的血浆处理后作为双空白样本。
（三）单空白样本
单空白样本是指包含内标物质但不包含待测物的基质经过提取后得到的样本。单空白样本用于确定内标降解、内标可能存在纯度问题以及残留待测分析物对于待测物峰面积的影响。
C62-A推荐判定标准为：单空白样本的待测峰面积应小于检测下限的20%。在每一分析批检测开始时至少检测一个单空白样本。本实验室单空白样本为加入内标的替代基质经前处理后获得。
双空白样本和单空白样本推荐严格按照上述的标准进行考察分析。如果不能通过考察，则提示该系统不能用于样本检测，需逐步排查原因。
（四）校准曲线
校准品是指已知浓度或已指定浓度的物质。为定量检测样本内分析物，需要建立已知浓度分析物与目标分析物响应值（峰面积、峰高、分析物与内标峰面积或峰高比值）之间的函数关系。校准曲线反应了方法可检测的范围，即定量范围。
C62-A建议检测至少6个浓度水平的校准品建立校准曲线。校准品的浓度范围推荐包括定量检测下限（lowerlimitofmeasuringinterval，LLMI）和定量检测上限（upperlimitofmeasuringinterval，ULMI），以及分析范围内的所有相关医学决定水平的浓度点。校准曲线作为定量检测的依据，其结果直接关系到样本检测的准确性。推荐判定标准为除了LLMI可放宽到偏差±20%，其余校准点均为±15%，超过范围的校准点则需要剔除。
在临床工作中，建议实验室尽量使用商品化校准品，如无法获得商品化校准品则可自行配制。推荐选择纯度高的校准品或认证参考物质进行校准品的配制。C62-A推荐校准品的基质尽可能同临床样本相类似。对于外源性分析物，推荐使用不含待测物的生物基质作为校准品基质；对于内源性分析物，推荐使用无待测物的“模拟”基质从而降低基质效应带来的影响。例如在检测类固醇激素或维生素时可首选商品化的无激素血浆或无维生素血浆。对于无法购买商品化校准品的项目则采用商品化无待测物基质加入纯品进行配制。因为“模拟”基质存在较复杂的基质效应问题，本实验室尽量不采用“模拟”基质［11］。
（五）质控品
LC-MS检测中使用质控品的目的是测试系统是否处于良好检测状态，同时监测校准曲线是否符合要求。
LC-MS临床检测项目的质控品目前分为两大类：商品化质控品和自配质控品。建议优先选择质谱方法专用质控品，如无质谱方法专用质控品，可选用非质谱方法专用质控品。在使用非质谱方法专用质控品前需评估该商品化质控品的稳定性并累积质控靶值。在没有商品化质控品的情况下，可使用自配质控品。自配质控品推荐由工作经验丰富的高年资人员进行配制，并采用盲法按性能要求进行评价［3］。自配质控品需选择合适的基质［11］。
对于外源性待测物，可选择无待测物的临床样本基质；对于内源性分析物，推荐使用无待测物的“模拟”基质从而减少基质效应。本实验室开展的伊马替尼、抗癫痫药物、抗生素质控基质采用不服用药物的临床样本血浆作为基质，而内源性的类固醇激素则使用无激素血浆配制。此外，在临床检测实践中，我们发现也可以通过具有定值的室间质评样本不定期评价方法的准确性。
推荐将质量控制浓度设置在接近医学决定水平附近上。同时，质控样本浓度设定应考虑定量范围，例如3倍LLMI、定量范围中位浓度以及接近ULMI的浓度点，也可设定在定量下限或者医学决定水平附近。
由本实验室主笔撰写的《液相色谱-质谱临床应用建议》推荐在每个分析批检测前、后均运行质控样本［7］。如果样本数量大，为防止方法出现性能下降的情况，需要增加质控频率。改变质控频率需要实验室主任批准。无论商品化或自配质控样本，实验室必须建立质控的可接受标准。对于商品化质控样本，生产商提供的可接受范围不能直接使用。
三、LC-MS临床检测中质控失控的排查
LC-MS临床检测的室内质控也可使用Levey-Jennings质控图进行监测。本实验室采用22s、13s规则。如果质控失控，应首先排除随机误差和质控品本身原因。其次，可以从色谱性能和质谱性能两个方面进行排查。色谱性能方面需考察峰形、干扰峰、基线噪音、保留时间漂移、携带污染等因素。质谱性能方面需考察信号强度改变、质量轴偏移、串扰等因素［12］。
LC-MS临床检测质量控制的难点和特殊性在于：即使质控品结果在控仍然需要考察内标峰面积、保留时间、峰形以及系统压力等参数。如果结果在控，但内标峰面积异常，则提示仪器响应出现异常，需要进行清洁维护等措施［13,14］。稳健的LC-MS临床检测方法的保留时间是稳定的。造成保留时间漂移的可能原因包括流动相配制错误、柱效下降、系统漏液、泵故障和柱温箱故障等［15］。必要时需要对色谱系统进行检查，排除受到泵和色谱柱故障的影响［16］。峰形异常包括拖尾峰、前沿峰、分叉峰和*峰等情况。拖尾峰的解决方案包括减少进样量解决样本过载问题，更换色谱柱解决柱效降低问题或重新安装管路减少死体积产生等。系统压力持续升高提示可能流路、色谱柱堵塞，系统压力下降则提示系统漏液、泵故障。
近年来，出于对精准检测的需求，在我国，医院的临床实验室开始选择开展LC-MS项目。然而，目前临床LC-MS检测仍处于LDT阶段，手工环节繁多，即使相同的检测项目配合相同的LC-MS系统，也可能会因为方法开发中参数设置、前处理方法、校准品或分析批设置等因素的差异而导致检测结果的不准确。LC-MS的不规范操作和不恰当的质量控制会导致错误的检测结果，直接影响临床医生的诊疗决策及患者的治疗效果。
综上所述，在临床检测中，我们应该规范化地进行LC-MS方法的建立、验证以寻求搭建一个稳健的检测平台。我们更应该重视LC-MS临床检测中分析批的规范化设置。分析批的规范化设置是LC-MS检测中室内质量控制的保障，可以帮助排除人员、试剂、耗材、仪器等产生的干扰因素，及时发现和解决问题。从而保证质谱检测结果的准确性，助力精准医疗，最终使患者受益。
所有作者均声明不存在利益冲突
参考文献（略）本文引用转载来源：郭玮.重视液相色谱-质谱临床检测中分析批的规范化设置[J].中华检验医学杂志,,44(5):-.DOI:10./cma.j.cn--.
-END-
历
质谱会议
学以质用，质求突破—第五届中山检验液相色谱-质谱技术临床应用培训通知
史
质谱会议
国际检验医学精准诊疗大会暨西部十三省市检验医学协作会议（第二轮）会议通知
文视频
中国医师协会检验医师年会暨第十六届全国检验与临床学术会议-开幕式大会报告：质谱技术在内分泌代谢疾病中的应用
章
视频
第三届北京临床质谱论坛临床质谱实验室管理主题主旨报告
历
视频
第三届北京临床质谱论坛蛋白定量主题主旨报告
史
视频
第三届北京临床质谱论坛：*素/元素主题报告
文视频
第三届北京临床质谱论坛：第二场临床质谱企业卫星会
章
视频
第三届北京临床质谱论坛：主旨报告及血药浓度监测（TDM）主题报告
历
质谱视频
LC-MS/MS在激素及儿茶酚胺检测中的应用及注意事项探讨（附专家共识）
史
视频
携手共赢，质心前行：临床质谱迈向精准诊断的新时代（王华梁院长）
文临床质谱
上海睿康生物超高效液相色谱串联质谱检测系统RZ-医用质谱仪获NMPA批准取得二类医疗器械注册证
章
质谱会议
第三届北京临床质谱论坛正式开幕
历
质谱会议
中国检验医师年会分论坛预告
5月13日第十二专题论坛——精准用药，质谱引领（附主会场直播链接）
史
质谱会议
直播预告
关于举办《分子医学与分子诊断高峰论坛》的第二轮会议通知
文柯瑞斯质谱平台恭祝大家新春快乐！牛年大吉！章
柯瑞斯质谱平台招贤纳士（上海·西安），3月25日前报名
历
质谱文献
高效液相色谱-串联质谱检测RNA中m6A水平方法的建立及其应用
史
质谱研究
同位素稀释质谱法测定血清肌酐浓度的不确定度评定
文质谱文献
儿茶酚胺及其代谢物的检测现状及标准化期望
章
室间质评
中国NCCL发布关于开展全国治疗药物监测项目（TDM）检测现状调查的通知
历
临床质谱
上海睿康生物首批6个二类临床质谱检测试剂盒获NMPA批准，3个为国内首家获批（液相色谱-串联质谱法）
史
CACLP
超10场临床质谱企业论坛/自办会议精彩回顾
文临床质谱
免疫检查点抑制剂致免疫介导性肝损伤研究进展
章
专家共识
免疫检查点抑制剂引起的内分泌系统免疫相关不良反应专家共识()
历
临床质谱
液相色谱串联质谱技术定量检测的临床应用现状与挑战
史
国家药监局关于发布YY/T.1-《医用质谱仪液相色谱-质谱联用仪》行业标准的公告（年第37号）
文肿瘤：基于超高效液相色谱-四级杆静电场轨道阱高分辨质谱技术的曲妥珠单抗辅助治疗人类表皮生长因子受体-2阳性乳腺癌血清代谢组学研究章
质谱文献
高效液相色谱-串联质谱检测RNA中m6A水平方法的建立及其应用
历
指南与共识
液相色谱－质谱临床应用建议
史
质量控制
临床检验液相色谱-质谱检验中质量控制
文专家共识
液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证
章
质谱研究
临床质谱LDT实验室自建方法评审中发现的主要问题和相关建议
历
临床质谱
叶酸检测标准化现状及挑战
史
临床质谱
临床质谱技术发展的现状
文指南与共识
维生素D及其类似物在慢性肾脏病患者中应用的中国实践方案（版）
章
质谱文献
组织原位特异性染色联合质谱检测技术在淀粉样变定性及沉积蛋白精准分型中的应用进展
质
质谱试剂
IVD质谱检测试剂盒注册申报要点图解（附已获批33个质谱试剂注册证）
谱
注册指南
三类串联质谱法临床质谱试剂注册：氨基酸、肉碱及琥珀酰丙酮检测试剂注册技术审查指导原则
平室间质评
国家卫健委临检中心年医疗机构临床实验室质谱项目室间质评汇总（临床质谱法EQA）
台
质谱仪器
IVD企业已获NMPA批准临床质谱检测仪器汇总（附27个国内取得医疗器械注册证的质谱仪清单）
历
临床质谱
免疫检查点抑制剂致免疫介导性肝损伤研究进展
史
指南解读
芳香族L-氨基酸脱羧酶缺乏症的诊断和治疗共识指南之解读
文指南解读
NGAL等早期敏感的急性肾损伤生物学标志物AKI早期诊断解读
章
指南解读
儿茶酚胺(CA)及其代谢物与儿童相关疾病临床诊断的相关性
专
专家共识
治疗药物监测（TDM）结果解读专家共识（）
家
专家共识
原发性醛固酮增多症诊断治疗的专家共识(版)
共专家共识
嗜铬细胞瘤和副神经节瘤诊断治疗专家共识(版)
识
专家共识
中国儿童维生素A、维生素D临床应用专家共识（版）
质
质谱文献
同型半胱氨酸与甲状腺疾病关系的研究进展
谱
质谱文献
同型半胱氨酸、叶酸检测在结肠息肉和结肠癌诊断中的意义
文临床质谱
同型半胱氨酸同位素稀释液相色谱串联质谱参考测量程序的建立及应用
献
同型半胱氨酸（Hcy）—高同型半胱氨酸血症及心血管病风险评估
临
质谱文献
超高效液相色谱－串联质谱法同时测定15种胆汁酸的方法分析
床
质谱文献
同位素稀释超高效液相色谱串联质谱法快速检测血清中多种脂溶性维生素含量
指临床指南
PCOS多囊卵巢综合征临床诊疗专家共识与中国诊疗指南
南
临床指南
21-羟化酶缺乏症诊疗指南（附：美国ES临床指南21-OHD所致CAH）
专
临床质谱
质谱联用技术在遗传代谢性疾病诊断中的应用
家
专家共识
质谱技术在临床微量元素检测中的应用共识（人员与环境篇）
共专家共识
质谱技术在临床微量元素检测中的应用共识（方法性能评估及质量控制篇）
识
专家共识
质谱技术在临床微量元素检测中的应用共识（仪器、试剂、耗材、检测规程篇）
注
注册指南
三类串联质谱法临床质谱试剂注册：氨基酸、肉碱及琥珀酰丙酮检测试剂注册技术审查指导原则
册
注册指南
NMPA发布25-羟基维生素D检测试剂注册技术审查指导原则
指注册指南
NMPA发布总三碘甲状腺原氨酸检测试剂注册技术审查指导原则
南
注册指南
NMPA发布泌乳素检测试剂注册技术审查指导原则
专
专家共识
中国核酸质谱应用专家共识
家
专家共识
新生儿先天性肾上腺皮质增生症筛查与诊断实验室检测技术专家共识
共专家共识
新生儿遗传代谢疾病检测试剂的注册现状审评概述及NBS串联质谱筛查技术专家共识
识
专家共识
MS/MS技术在新生儿氨基酸、有机酸及脂肪酸氧化代谢障碍性疾病筛查中的应用共识
WWW.CTMFHC.COM
寻求科学的答案，发现质谱的力量
柯瑞斯质谱平台
创新的实验室科学分析解决方案
柯瑞斯质谱平台专注于推动质谱技术在中国临床检验中的应用，加速质谱设备的国产化进程，致力于在肿瘤和无创产前诊断领域引领行业发展，更好地为中国精准诊疗服务，为健康中国助力。
声明：本
